Příprava živných médií – Článek v Jekatěrinburgu | Medica Group

V procesu mikrobiologického výzkumu jsou čisté kultury mikroorganismů izolovány, kultivovány a následně studovány na jejich vlastnosti. Kultury sestávající z mikroorganismů stejného druhu se nazývají čisté. Používají se při provádění diagnostických opatření v procesu identifikace infekčních onemocnění, určování druhu a typu.

Kultivace mikroorganismů se provádí pomocí speciálních substrátů – živných médií. Kultivační média pěstovaná v umělých podmínkách umožňují sledovat všechny procesy mikroorganismů – výživu, dýchání a rozmnožování.

Vlastnosti živných médií používaných pro kultivaci

Výsledky studie závisí na kvalitě živného média. Pro vytvoření optimálních podmínek pro život mikrobů musí prostředí splňovat určité parametry:

• Nutriční hodnota. Musí obsahovat všechny potřebné látky, které zajistí snadnou stravitelnost a také uspokojení potravinových a energetických potřeb. V některých případech jsou vitamíny a aminokyseliny speciálně přidávány do živných médií, aby byl zajištěn nezbytný růst buněk.
• Optimální koncentrace vodíkových iontů. Pro zajištění potřebné propustnosti buněčné membrány.
• Izotonicita. Udržet osmotický tlak v prostředí v souladu s tlakem uvnitř buňky.
• Sterilita. Vyloučit cizí mikroby, které mohou narušovat růst.
• Optimální konzistence.
• Redoxní potenciál.
• Jednotnost. Poskytuje konstantní množství přísad.

Pro snadné sledování růstu pěstovaných plodin by médium mělo být průhledné.

Živná média lze klasifikovat podle několika parametrů:

• Složení složky. Podle tohoto kritéria se média dělí na přírodní a syntetická. U přírodních se používají produkty živočišného a rostlinného původu. K přípravě syntetických médií se používají organické a anorganické sloučeniny chemicky čistého typu.
• Úroveň hustoty. Podle konzistence se média dělí na tekutá, hutná a polotekutá. Pro získání požadované hustoty použijte agar-agar nebo želatinu.
• Struktura. Podle tohoto kritéria se prostředí dělí na jednoduchá a složitá.
• Jmenování. Média se dělí na běžná, speciální, elektivní, diferenciálně diagnostická a konzervační.

Vlastnosti složení živných médií pro kultivaci

Hlavními složkami jakéhokoli živného média jsou sloučeniny uhlíku a dusíku. Mnoho mikroorganismů dobře roste a vyvíjí se v přirozených médiích, protože obsahují velké množství potřebných složek. Ale zřídka se používají ke studiu fyziologie metabolismu, protože jejich složení je složité a variabilní. K tomu je pohodlnější a informativnější používat syntetická média.

Příprava kultivačních médií

Při přípravě médií byste měli používat přísně čisté nádoby, které neobsahují cizí látky – alkálie nebo oxidy, stejně jako rez. Optimální je používat smaltované, skleněné nebo hliníkové nádoby. Pokud je potřeba připravit velké objemy médií, používají se speciální vyhnívací nádrže nebo reaktory. Před zahájením vaření nádobí důkladně umyjte, osušte a osušte. Skleněné nádoby je nutné nejprve vyvařit v kyselině chloru a vodíku.

Důležité! Misky na přípravu kultivačních médií se nesmí používat k jiným účelům.

Hlavní složkou většiny kultivačních médií jsou produkty živočišného a rostlinného původu. K přípravě výživných vývarů se používá masová voda nebo digesty z kyselé nebo enzymatické hydrolýzy. Nejčastěji se používá Hottingerův pankreatický digest, kaseinové hydrolyzáty a krmné kvasnice. Na jejich základě se připravují různá média.

Etapy přípravy kultivačních médií

Proces přípravy kultivačního média se skládá z následujících kroků:

1. Vaření. Lze jej provádět na otevřeném ohni, ve vodní lázni, pomocí autoklávu nebo digestoře, které jsou ohřívány párou.
2. Stanovení optimální hodnoty pH. Provádí se pomocí indikátorových papírků. Zařízení používané pro tuto operaci je potenciometr nebo komparátor, což jsou stojany s přihrádkami na zkumavky a sadou pH standardů. V tomto případě se barvy kapalin ve zkumavkách porovnávají s referenční barvou.
3. Osvětlení. Tato operace se provádí, pokud se médium během procesu vaření zakalí nebo ztmavne. Pro vyjasnění lze použít slepičí bílek smíchaný s dvojnásobnou porcí vody, kterou předem důkladně promícháme a provaříme. Někdy se pro tyto účely používá krevní sérum.
4. Rozlít. Provádí se ve speciálních zkumavkách o objemu 3-5 nebo 10 ml. Mohou to být také lahvičky nebo baňky, speciální lahvičky. Pokud se ke sterilizaci médií používají teploty nad 100 °C, nalévají se do suchých čistých nádob. Pokud je pro sterilizaci použita nižší teplota, pak se plnění provádí do sterilních nádob. K nalévání použijte nálevku, na jejímž konci je pryžová hadička s Mora svorkou Filtrace. Provádějte pro tekutá a roztavená želatinová média. K tomu použijte mokré filtry na bázi papíru nebo látky. Agarová média se obtížněji filtrují, protože poměrně rychle tuhnou. Místo toho agarová média nejčastěji používají usazování s tavením v autoklávu.
5. Sterilizace. Režim sterilizace se volí s ohledem na pokyny v receptu a v závislosti na složení složek. Přibližné schéma sterilizace je uvedeno v tabulce.
6. Ovládání. Sterilita je řízena pomocí termostatu. K tomu je médium umístěno v něm na dva dny. Pokud při vyšetření nejsou žádné známky růstu, médium je považováno za sterilní a odesláno k chemické kontrole. Chemická je dalším typem kontroly, díky které se pH konečně nastaví. Provádí se v chemické laboratoři. Dalším typem kontroly je biologická kontrola, pomocí které se zjišťují nutriční vlastnosti média.

1) se sacharidy, mlékem, želatinou

Autokláv s otevřeným víkem nebo Kochův přístroj 100 °C (proudící pára)

30-60 min, 3 dny v řadě (frakční sterilizace)

Skladování médií se provádí při pokojové teplotě, ve skříních speciálně navržených pro tento účel. Kompozice s krví nebo vitamíny se skladují v chladničkách.

Zásady pro přípravu jednoduchých a složitých kultivačních médií

Normální růst mikroorganismů je možný pouze v určitém živném médiu sestávajícím ze specifického souboru složek, navíc tyto složky musí být obsaženy ve zvláštních poměrech.

Jednoduché střední recepty

Izotonický roztok chloridu sodného. Připraveno na základě 1 litru destilované vody smíchané s 9 gramy chloridu sodného. Směs se zfiltruje a upraví se na požadované pH, načež se v případě potřeby sterilizuje při teplotě 120 °C po dobu půl hodiny.

Masový peptonový vývar. Masová voda se smíchá s 1 % peptonu a 0,5 % chemické čistoty. chlorid sodný. Dále vařte na mírném ohni 10-15 minut, dokud se přísady úplně nerozpustí. Dále nastavte požadované pH a poté znovu vařte, dokud se nevytvoří sraženina. Po filtraci se objem přidá k původnímu objemu a sterilizace se provádí při 120 °C po dobu 20 minut.

Hottinterův vývar. K přípravě se používá Hottingerův digest, který se ředí vodou 5-6x s přihlédnutím k obsahu aminového dusíku. Přidejte 0,5% chlorid sodný do zředěné fermentace a poté vařte na mírném ohni, dokud se sůl úplně nerozpustí. Požadované pH se nastaví v již vychlazeném prostředí, poté se po dobu 20 minut provádí filtrace, stáčení a sterilizace.

Masový peptonový agar. Do hotového vývaru (ve fázi před nebo po sterilizaci) se přidá 2-3% agar-agaru a následně se vaří. Směs připravujte na mírném ohni za stálého míchání, dokud se agar zcela nerozpustí. K přípravě můžete použít autokláv nebo Kochův přístroj. V případě potřeby lze připravené médium čiřit, filtrovat nebo sterilizovat.

Polotekutý agar obsahuje 0,4-0,5 % agar-agaru.

Výživná želatina. K přípravě použijte hotový vývar, do kterého se přidá 10-15% želatiny. Směs se zahřívá, ale nevaří, dokud se želatina úplně nerozpustí, načež se kapalina nalije do sterilních nádob a sterilizuje pomocí proudící páry.

Recepty pro složitá prostředí

Média se sacharidy. Hlavní vývar nebo roztavený agar se doplní požadovaným množstvím určitého sacharidu (asi 0,1-2%). Po úplném rozpuštění se kompozice nalije do sterilních nádob a sterilizuje se proudící párou. Po kontrole sterility lze médium použít ke kultivaci.

Média s krví. K jejich přípravě se používají jednoduchá sterilní média, do kterých se za aseptických podmínek přidává defibrinovaná krev (až 30 %). Média na bázi agaru se před přidáním roztaví a ochladí na 45 stupňů Celsia.

Důležité! Je zakázáno rozpouštět média krví, aby nedošlo ke změně vlastností kompozice.

Média s krevním sérem. Připravuje se stejným způsobem jako předchozí formulace. Do základního média se přidává od 10 do 20 % séra bez konzervačních látek, které je předem inaktivováno.

Média se žlučí. Žluč se přidává do jednoduchých médií (10-40 % objemu). Po nastavení požadovaného pH se provádí sterilizace při teplotě 120 stupňů Celsia po dobu 20 minut.

Suché prostředí

Vyrábějí také suchá média, což jsou prášky v lahvích. Jejich štítky uvádějí pravidla pro přípravu kompozic. Mohou to být jak jednoduchá a speciální prostředí, tak elektivní a diferenciální diagnostika. Výhodou suchých přípravků je, že se snadno připravují a lze je použít i v kempingových podmínkách. Mohou být vyrobeny z náhražek masa.

Pozornost! Společnost Medica Group prodává automatické mikrobiologické analyzátory a lahvičky s živnými médii, ale neposkytuje služby pro sběr nebo interpretaci výsledků krevních testů.

Поделиться ссылкой: